SAŽETAK I OBJAŠNJENJE TESTA
Malarija je hemolitička febrilna bolest koju prenose komarci i zarazi preko 200 milijuna ljudi i ubije više od milijun ljudi godišnje.Uzrokuju ga četiri vrste plazmodija: P. falciparum, P. vivax, P. ovale i P. malariae.Svi ti plazmodiji inficiraju i uništavaju ljudske eritrocite, uzrokujući zimicu, vrućicu, anemiju i splenomegaliju.P. falciparum uzrokuje ozbiljnije bolesti nego druge plazmodijalne vrste i odgovoran je za većinu smrti od malarije.P. falciparum i P. vivax su najčešći patogeni, međutim, postoje značajne geografske varijacije u distribuciji vrsta.
Tradicionalno, malarija se dijagnosticira pokazivanjem organizama na Giemsa obojenim debelim razmazima periferne krvi, a različite vrste plazmodija razlikuju se po njihovom pojavljivanju u zaraženim eritrocitima1.Tehnika je sposobna postaviti točnu i pouzdanu dijagnozu, ali samo kada je izvode vješti mikroskopisti koristeći definirane protokole2, što predstavlja veliku prepreku za udaljena i siromašna područja svijeta.
Malaria Pf / Pan Antigen Rapid Test Kit razvijen je za rješavanje ovih prepreka.Test koristi par monoklonskih i poliklonskih antitijela na specifičan protein P. falciparum, Histidin Repeat Protein II (pHRP-II) i par monoklonskih antitijela na plazmodij laktat dehidrogenazu (pLDH), protein koji proizvode četiri vrste plazmodija, čime se omogućuje istovremeno otkrivanje i diferencijacija infekcije s P. falciparum i ili bilo kojim drugim tri plazmodija.Može ga izvoditi neobučeno ili minimalno kvalificirano osoblje, bez laboratorijske opreme.
NAČELO
Pf/Pan pribor za brzi test malarije je imunološki kromatografski test s bočnim protokom.Komponente test trake sastoje se od: 1) jastučića konjugata bordo boje koji sadrži mišje anti-PHRP-II antitijelo konjugirano s koloidnim zlatom (pHRP II-zlatni konjugati) i mišje anti-pLDH antitijelo konjugirano s koloidnim zlatom (pLDH-zlatni konjugati),
2) traka s nitroceluloznom membranom koja sadrži dvije ispitne trake (Pan i Pv trake) i kontrolnu traku (C traka).Pan traka je prethodno obložena monoklonskim anti-pLDH antitijelima pomoću kojih se može detektirati infekcija bilo kojom od četiri vrste plazmodija, Pf traka je prethodno obložena poliklonalnim anti-pHRP-II antitijelima za detekciju Pf infekcije, a C traka je presvučena kozjim anti-mišjim IgG.
Tijekom testa, odgovarajuća količina uzorka krvi se raspoređuje u jažicu za uzorke (S) testne kasete, pufer za lizu se dodaje u jažicu pufera (B).Pufer sadrži deterdžent koji lizira crvena krvna zrnca i oslobađa različite antigene plazmodija, koji migriraju kapilarnim djelovanjem preko trake koja se drži u kaseti.Ako je pHRP-II prisutan u uzorku, vezat će se na konjugate pHRP II-zlato.Imunokompleks je zatim zarobljen na membrani pomoću prethodno obloženih anti-pHRPII antitijela, tvoreći Pf traku bordo boje, što ukazuje na Pf pozitivan rezultat testa.pLDH, ako je prisutan u uzorku, vezat će se na konjugate zlata pLDH.Imunokompleks je tada zarobljen na membrani pomoću prethodno obloženog anti pLDH antitijela, tvoreći Pan traku bordo boje, što ukazuje na pozitivan rezultat testa na plazmodij.U nedostatku Pan trake, može se preporučiti pozitivan rezultat testa za bilo koji od ostala tri plazmodija.
Odsutnost ispitnih vrpci (Pan i Pf) ukazuje na negativan rezultat.Test sadrži unutarnju kontrolu (C vrpca) koja bi trebala pokazivati bordo obojenu vrpcu imunokompleksa kozjeg anti-mišjeg IgG / mišjeg IgG (pHRP-II i pLDH-zlatni konjugati) bez obzira na razvoj boje na bilo kojoj od testnih vrpci.U suprotnom, rezultat testa je nevažeći i uzorak se mora ponovno testirati drugim uređajem.
