SAŽETAK I OBJAŠNJENJE TESTA
Malarija je hemolitička febrilna bolest koju prenose komarci i zarazi preko 200 milijuna ljudi i ubije više od milijun ljudi godišnje.Uzrokuju ga četiri vrste plazmodija: P. falciparum, P. vivax, P. ovale i P. malariae.Svi ti plazmodiji inficiraju i uništavaju ljudske eritrocite, uzrokujući zimicu, vrućicu, anemiju i splenomegaliju.P. falciparum uzrokuje ozbiljnije bolesti nego druge plazmodijalne vrste i odgovoran je za većinu smrti od malarije.P. falciparum i P. vivax su najčešći patogeni, međutim, postoje značajne geografske varijacije u distribuciji vrsta.
Tradicionalno, malarija se dijagnosticira pokazivanjem organizama na Giemsa obojenim debelim razmazima periferne krvi, a različite vrste plazmodija razlikuju se po njihovom pojavljivanju u zaraženim eritrocitima.Tehnika je sposobna za točnu i pouzdanu dijagnozu, ali samo kada je izvode vješti mikroskopisti koristeći definirane protokole, što predstavlja veliku prepreku za udaljena i siromašna područja svijeta.
Malaria Pf/Pv Ag brzi test razvijen je za rješavanje ovih prepreka.Koristi antitijela specifična za P. falciparum histidinom bogatim proteinom-II (pHRP-II) i za P. vivax laktat dehidrogenazu (Pv-LDH) za istovremeno otkrivanje i razlikovanje infekcije s P. falciparum i P. vivax.Test može izvesti neobučeno ili minimalno kvalificirano osoblje, bez laboratorijske opreme
NAČELO
Malaria Pf/Pv Ag brzi test je kromatografski imunološki test s bočnim protokom.Komponente testne trake sastoje se od: 1) konjugiranog jastučića tamnocrvene boje koji sadrži mišje anti-Pv-LDH antitijelo konjugirano s koloidnim zlatom (Pv-LDH-zlatni konjugati) i mišje anti-pHRP-II antitijelo konjugirano s koloidnim zlatom (pHRP-II-zlatni konjugati), 2) nitrocelulozna membranska traka koja sadrži dvije testne trake (Pv i Pf trake) i kontrolnu traku ( C pojas).Pv traka je prethodno obložena drugim mišjim anti-Pv-LDH specifičnim antitijelom za detekciju Pv infekcije, Pf traka je prethodno presvučena poliklonalnim anti-pHRP-II antitijelima za detekciju Pf infekcije, a C traka je presvučena kozjim anti-mišjim IgG.
Tijekom testa, odgovarajuća količina uzorka krvi se raspoređuje u jažicu za uzorke (S) testne kasete, pufer za lizu se dodaje u jažicu pufera (B).Pufer sadrži deterdžent koji lizira crvena krvna zrnca i oslobađa različite antigene koji migriraju kapilarnim djelovanjem preko trake koja se drži u kaseti.Pv-LDH, ako je prisutan u uzorku, vezat će se na konjugate Pv-LDH-zlato.Imunokompleks se zatim hvata na membrani pomoću prethodno obloženog anti-Pv-LDH antitijela, tvoreći Pv traku bordo boje, što ukazuje na Pv pozitivan rezultat testa.Alternativno, pHRP-II ako je prisutan u uzorku će se vezati na konjugate pHRP-II-zlato.Imunokompleks je zatim zarobljen na membrani pomoću prethodno obloženih anti-pHRP-II antitijela, tvoreći Pf traku bordo boje, što ukazuje na Pf pozitivan rezultat testa.Odsutnost ispitnih traka ukazuje na negativan rezultat.Test sadrži unutarnju kontrolu (C vrpca) koja bi trebala pokazivati bordo obojenu vrpcu imunokompleksa kozjeg anti-mišjeg IgG / mišjeg IgG (anti-Pv-LDH i anti-pHRPII)-zlatnog konjugata bez obzira na razvoj boje na bilo kojoj od testnih vrpci.U suprotnom, rezultat testa je nevažeći i uzorak se mora ponovno testirati drugim uređajem.
